简述单克隆抗体的主要技术路线。简述单克隆抗体的主要技术路线。

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简述单克隆抗体的主要技术路线。

(1)【◆题库问题◆】:[问答题,简答题] 简述单克隆抗体的主要技术路线。

【◆参考答案◆】:单克隆抗体的制备:①动物免疫与亲本细胞的选择;②细胞融合:淋巴细胞杂交瘤的制备;③杂交瘤细胞的筛选:有限稀释法等;④单克隆抗体的制备和冻存;⑤单克隆抗体的纯化亲本细胞的选择:①骨髓瘤细胞:一般不分泌抗体,能在体外无限繁殖和连续继代培养,且为HGPRT-(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)或TK-(胸腺嘧啶核苷激酶)缺陷。多用BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞。②淋巴细胞:经过免疫处理的淋巴细胞,多用大鼠或小鼠。③免疫方法:对细胞或微生物抗原可直接注射如小鼠体内,可溶性蛋白抗原可与等量的福氏完全佐剂混合乳化后,注入到动物体内。细胞融合:将免疫脾细胞和小鼠骨髓细胞以2:1或10:1的比例混匀于50ml锥形离心管内,1200rpm离心;10分钟,尽量吸净上清液,用手指轻击管壁,使管底沉淀的细胞铺展成薄层,在室温条件下边轻轻振摇离心管边在60秒钟内逐滴加入50%的PEG0.5ml,随后静置90秒,再于5分钟内边振摇边逐滴加入5-10ml不含血清的培液或盐水缓冲液,以终止PEG的作用,再静置10分钟。HAT培养基筛选杂交瘤细胞:细胞团块分散后,加HAT溶液,即可加入有饲养细胞的96孔塑料培养板内每孔0.1ml,用HAT选择性培养时隔4-5天换液,8-10天后可以选择检测。HAT选择系统:HAT是含一定浓度次黄嘌呤(H)、氨基喋呤A.及胸腺嘧啶核苷(T)的一种选择性培养基,其中三种成分与细胞DNA合成有关。

(2)【◆题库问题◆】:[填空题] 常用来分离研究膜蛋白、使细胞膜崩解的试剂是()。

【◆参考答案◆】:去垢剂

(3)【◆题库问题◆】:[单选] 关于紧密连接(封闭连接)的结构和功能,下列叙述中哪项是错误的()
A.广泛分布于各种上皮细胞管腔面细胞间隙的顶端
B.相邻细胞膜点状融合,形成一条封闭带,连接处无细胞间隙
C.通过一种依赖Ca2+的粘着机制使相邻细胞的跨膜蛋白互相粘着
D.将膜两端不同的功能蛋白隔开,保证物质转运的方向性
E.封闭上皮细胞的间隙形成一道与外界隔离的封闭带,保证组织内环境的稳定性

【◆参考答案◆】:C

(4)【◆题库问题◆】:[多选] 类风湿关节炎可能与下列哪些细胞结构及细胞组分异常有关()
A.胶原
B.内质网
C.溶酶体
D.核糖体

【◆参考答案◆】:A, C

(5)【◆题库问题◆】:[判断题] 果蝇生殖细胞在减数分裂时没有同源染色体非姐妹染色单体片断互换现象发生。
A.正确
B.错误

【◆参考答案◆】:正确

(6)【◆题库问题◆】:[判断题] 阳离子螯合剂EDTA可以破坏Ca或Mg依赖的细胞黏着。
A.正确
B.错误

【◆参考答案◆】:正确

(7)【◆题库问题◆】:[名词解释] nucleoid (拟核)

【◆参考答案◆】:细菌细胞具有原始的核,没有核膜,更没有核仁,结构简单,为了与真核细胞中典型的细胞核有所区别,称为核区(nuclearregion)、拟核(nucleoid)或原始核(primitive  form  nucleus),亦称细菌染色体。

(8)【◆题库问题◆】:[问答题,简答题] 什么是紧密连接?

【◆参考答案◆】:紧密连接又称封闭小带,存在于脊椎动物的上皮细胞间,是封闭连接的主要形式。相邻细胞之间的质膜紧密结合,没有缝隙,能防止溶液中的分子沿细胞间隙渗入体内,从而保证了机体内环境的相对稳定。

(9)【◆题库问题◆】:[填空题] 在组成型胞吐途径中,新合成的囊泡内可溶性蛋白分泌到细胞外的三个去向是有的成为()、有的形成()、有的作为营养成分或号分子扩散到胞外液。

【◆参考答案◆】:质膜外周蛋白;胞外基质组成

(10)【◆题库问题◆】:[多选] 下列哪些物质运输方式不需要消耗ATP()
A.协助扩散
B.自由扩散
C.质子泵
D.内吞作用

【◆参考答案◆】:A, B

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