cell culture(细胞培养)(1)【◆题库问题◆】：[名词解释] cell culture(细胞培养)
【◆参考答案◆】：把机体内的组织取出后经过分散（机械方法或酶消化）为单个细胞，在人工培养的条件下，使其生存、生长、繁殖、传代，观察其生长、繁殖、接触抑制、衰老等生命现象的过程。
(2)【◆题库问题◆】：[问答题] 细胞培养应注意哪些问题？
【◆参考答案◆】：
体外培养细胞必须注意三个环节：物质营养、生存环境和废物的排除。
体外培养细胞所需的营养是由培养基提供的。培养基通常含有细胞生长所需的氨基酸、维生素和微量元素。一般培养细胞所用的培养基是合成培养基，它含有细胞生长必需的营养成分：但是在使用合成培养基时需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清为主。这是因为血清中含有多种促细胞生长因子和一些生物活性物质。
由于血清中含有一些不明成分，对于特殊目的细胞培养是不利的。为此，研究人员正在探索无血清培养细胞的条件，并已经取得一些进展。由于机体内的细胞生长通常需要不同的细胞因子进行调节，所以，在无血清培养时仍然需要添加必要的因子，包括促细胞生长因子（如EGF.，促贴附物（如层黏连蛋白）和其他活性物质（如转铁蛋白）。无血清培养排除了有血清培养时血清中不明因素的干扰，使实验结果更加可靠。
体外细胞培养必须模拟体内细胞生长的环境。环境因素主要是指无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境。气体主要有两种，即O2和CO2。后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。
活体内生长的细胞所产生的代谢物和废物通过一定的系统进行利用和排除。体外培养细胞产生的代谢物和废物积累在培养液中，所以定期更换培养液，对于体外细胞培养也是至关重要的。
体外培养细胞必须注意三个环节：物质营养、生存环境和废物的排除。
体外培养细胞所需的营养是由培养基提供的。培养基通常含有细胞生长所需的氨基酸、维生素和微量元素。一般培养细胞所用的培养基是合成培养基，它含有细胞生长必需的营养成分：但是在使用合成培养基时需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清为主。这是因为血清中含有多种促细胞生长因子和一些生物活性物质。
由于血清中含有一些不明成分，对于特殊目的细胞培养是不利的。为此，研究人员正在探索无血清培养细胞的条件，并已经取得一些进展。由于机体内的细胞生长通常需要不同的细胞因子进行调节，所以，在无血清培养时仍然需要添加必要的因子，包括促细胞生长因子（如EGF.，促贴附物（如层黏连蛋白）和其他活性物质（如转铁蛋白）。无血清培养排除了有血清培养时血清中不明因素的干扰，使实验结果更加可靠。
体外细胞培养必须模拟体内细胞生长的环境。环境因素主要是指无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境。气体主要有两种，即O2和CO2。后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。
活体内生长的细胞所产生的代谢物和废物通过一定的系统进行利用和排除。体外培养细胞产生的代谢物和废物积累在培养液中，所以定期更换培养液，对于体外细胞培养也是至关重要的。
(3)【◆题库问题◆】：[问答题,简答题] 何谓免疫荧光技术？可自发荧光的细胞物质是否可在普通显微镜下看到荧光？
【◆参考答案◆】：1）免疫荧光技术是将免疫学方法（抗体同特定抗原专一结合）与荧光标记技术相结合用来研究特异蛋白抗原在细胞内分布、对抗原进行定位测定的技术。它主要包括荧光抗体的制备、标本的处理、免疫染色和观察记录等过程。2）不能。首先，荧光是因一定波长（能量）的光（一般为紫外光）照射到物体后瞬间产生的，作为普通显微镜光源的可见光，其能量不足以使物体产生荧光；其次，所产生荧光的波长要比入射光的要长，即使可以激发出荧光，肉眼也看不到。
(4)【◆题库问题◆】：[单选] 从破碎的细胞中分离收集线粒体一般所需的仪器是（）
A．流式细胞分选仪
B．超速离心机
C．高速离心机
D．低速离心机
E．电泳仪
A．流式细胞分选仪
B．超速离心机
C．高速离心机
D．低速离心机
E．电泳仪
【◆参考答案◆】：C
(5)【◆题库问题◆】：[名词解释] 细胞融合
【◆参考答案◆】：
又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，2个或2个以上的细胞合并成为一个细胞的现象。
又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，2个或2个以上的细胞合并成为一个细胞的现象。
(6)【◆题库问题◆】：[名词解释] resolution (分辨率)
【◆参考答案◆】：是指区分开两个质点间的最小距离。
(7)【◆题库问题◆】：[名词解释] fluorescencein situ hybridization ；FISH（荧光原位杂交）
【◆参考答案◆】：用荧光素标记的探针研究一段DNA序列或一个基因在染色体上的位置的方法，是在生物医学领域里应用较多的一项分子细胞遗传学技术。
(8)【◆题库问题◆】：[名词解释] electron microscope three-dimentional reconstruction technique (电镜三维重构技术)
【◆参考答案◆】：电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学，主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。
(9)【◆题库问题◆】：[问答题] 根据所学的细胞生物学知识，论述“克隆羊”多利诞生的基本原理和基本的操作过程及主要技术。
【◆参考答案◆】：
基本原理：动物高度分化的细胞核具有全套的个体遗传信息，保持着全能性，有发育为完整个体的潜在能力。
基本步骤：
（1）取出一只成年母羊的乳腺上皮细胞，在低血清浓度下进行体外培养。
（2）取出卵细胞供体母羊的卵母细胞进行去核处理。
（3）利用电融合技术使乳腺上皮细胞与去核卵母细胞进行电融合。
（4）将融合细胞在体外培养至囊胚期。
（5）将囊胚移植到母羊的子宫内，使其着床和发育，直至生出小羊。
主要技术：细胞培养；细胞融合；胚胎培养和胚胎移植。
基本原理：动物高度分化的细胞核具有全套的个体遗传信息，保持着全能性，有发育为完整个体的潜在能力。
基本步骤：
（1）取出一只成年母羊的乳腺上皮细胞，在低血清浓度下进行体外培养。
（2）取出卵细胞供体母羊的卵母细胞进行去核处理。
（3）利用电融合技术使乳腺上皮细胞与去核卵母细胞进行电融合。
（4）将融合细胞在体外培养至囊胚期。
（5）将囊胚移植到母羊的子宫内，使其着床和发育，直至生出小羊。
主要技术：细胞培养；细胞融合；胚胎培养和胚胎移植。
(10)【◆题库问题◆】：[问答题] 简述细胞生物学的主要研究方法？
【◆参考答案◆】：
代表细胞生物学传统和发展方向的研究方法，可以分为四大方面。
（1）显微技术，这是进行细胞形态结构观察的方法，包括光学显微术、电子显微术和扫描隧道显微术等，目前的分辨本领已达到0.1nm的水平，可以直接观察到DNA．RNA和蛋白质等生物大分子及生物膜、病毒等结构。
（2）细胞组分的分析与原为检测技术，这类方法可对亚细胞结构和生物大分子进行分离和纯化，并可在细胞的原位上检测亚细胞结构和某些大分子的存在状况；
（3）细胞培养和细胞工程技术，这是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究和生物工程中重要的实验技术，具有广泛的、重要的理论意义和实践价值；
（4）分子生物学技术，如核酸和蛋白成分的分析和序列测定；核酸的杂交、PCR、基因的克隆与表达以及基因的剔除、RNA干扰技术等，这些都是当今细胞生物学研究中常常使用的实验方法。而且一些物理、化学和信息处理技术也正在被用于细胞生物学的研究。现代细胞生物学的方法及其多样和处于不断的发展当中。
代表细胞生物学传统和发展方向的研究方法，可以分为四大方面。
（1）显微技术，这是进行细胞形态结构观察的方法，包括光学显微术、电子显微术和扫描隧道显微术等，目前的分辨本领已达到0.1nm的水平，可以直接观察到DNA．RNA和蛋白质等生物大分子及生物膜、病毒等结构。
（2）细胞组分的分析与原为检测技术，这类方法可对亚细胞结构和生物大分子进行分离和纯化，并可在细胞的原位上检测亚细胞结构和某些大分子的存在状况；
（3）细胞培养和细胞工程技术，这是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究和生物工程中重要的实验技术，具有广泛的、重要的理论意义和实践价值；
（4）分子生物学技术，如核酸和蛋白成分的分析和序列测定；核酸的杂交、PCR、基因的克隆与表达以及基因的剔除、RNA干扰技术等，这些都是当今细胞生物学研究中常常使用的实验方法。而且一些物理、化学和信息处理技术也正在被用于细胞生物学的研究。现代细胞生物学的方法及其多样和处于不断的发展当中。